Aplikace genové zbraně ve vývoji ovoce

Cherry je ovoce, které je relativně závislé na klimatu. Během vývoje ovoce je jeho zrání regulováno kyselinou abscisovou (ABA).

V této studii byly pro identifikaci čtyř cDNA kódujících 8'-hydroxylázu (klíčový enzym pro oxidativní katabolismus ABA) v sladkých třešňových plodech použity virově indukované genové umlčení (VIGS) a bombardování částicemi. Kyselina deoxyribonukleová) Paccyp707a1-a4

Paccyp707a2 negativně reguluje dozrávání třešní a paccyp707a1 zprostředkovává toleranci sucha

Virus umlčující genové umlčení (VIGS) označuje virus infikující rostlinu nesoucí cílový genový fragment, který může indukovat endogenní umlčení genu, způsobit fenotypové změny a poté studovat funkci cílového genu na základě fenotypové variace.

Obrázek 1. Změny v biosyntéze ABA (pacnced1), ABA katabolismu (paccyp707as) a genech souvisejících s obsahem ABA během vývoje a zrání sladkých třešní. a) Absolutní transkripční úrovně čtyř pacyp707 během vývoje ovoce. (b) Relativní úrovně transkriptů akumulované pcnced1 a aba během vývoje. Actin byl použit jako vnitřní kontrola a jeho exprese byla detekována pomocí qrt-pcr.

Exprese genu pAccyp707a v dehydratační reakci

Plody sebrané z 32 dnů byly rozděleny do dvou skupin a rychlost ztráty vody byla 16% při 45% relativní vlhkosti po skladování po dobu 3 dnů za podmínek nízké relativní vlhkosti (45%) a vysoké relativní vlhkosti (100%). Obsah ABA a hladina transkripce pNCED1 u ovoce byly významně vyšší než u kontrolní skupiny. Ovládá (obrázek 2). Naproti tomu exprese Paccyp707a1 byla po dehydrataci významně snížena a exprese Paccyp707a3 byla také snížená, i když v menší míře, a exprese Paccyp707a4 a Paccyp707a2 nebyla dehydratací ovlivněna (obr. 2). Nejvýznamnější změna nastala v expresi paccyp707a1, což může být hlavní člen rodiny genů paccyp707a reagující na sucho během zrání ovoce.

Umlčení genu Paccyp707A2 podporuje zbarvení a zrání ovoce

Fenotyp ovoce byl ošetřen Paccyp707A1 / 2-RNAi. 28. den po rozkvětu bylo vybráno 90 plodů ze tří třešní vysazených v samostatných sadech a rozděleno do tří skupin po 30 kusech pro experimenty s umlčováním genů vyvolané viry.

Paccyp707a1-rnai, paccyp707a2-rnai a kontrolní trvající vektor (bez genu cyp707a) byly injikovány do pedicelů plodů skupin 1, 2 a 3, v tomto pořadí.

Ovoce bylo hodnoceno 7 dní po inokulaci.

a) ošetření ovoce; d) 28 dní po odkvětu;

b) 43d k ošetření ovoce;

(c) ošetření ovoce vektorem trvajícím 43d trváním (bez genu cyp707a);

(d) 43 d ovoce ošetřeného pacyp707a1 RNAi;

(e) ošetření ovoce paccyp707a2 RNAi;

f) ovoce ošetřené Paccyp707a2 RNAi 6 dní po ošetření (pravá kontrola);

g) paccyp707a1 RNAi 6 dní po ošetření ovoce (kontrolní ovoce vpravo).