Program přípravy zbytkových DNA hostitelských buněk
May 21, 2021
Zanechat vzkaz
Rekombinantní proteinová léčiva, protilátková léčiva, vakcíny a další produkty v biologických produktech jsou exprimovány a produkovány kontinuálními buněčnými liniemi. I když prošly přísným procesem čištění, mohou v produktech stále být zbytkové fragmenty DNA hostitelské buňky (rDNA).
Tyto rDNA mohou ovlivnit funkci klíčových genů receptoru, a tak přinést riziko infekční nebo tumorigenicity.
Proto je zvláště důležité, jak efektivně a stabilně získat stopovou rDNA ve vzorku. V současné době existují hlavně následující metody:
| Metody | Výhoda | Nevýhoda |
| Fenol / chloroform | Vysoká čistota DNA a vysoký obsah | Časově náročné, těžkopádné kroky a toxické |
| Srážení jodidem sodným | snadné použití | Časově náročný a nestabilní obsah DNA |
| Sloupcová metoda | Jednoduché a vysoké čistoty | Časově náročné a obtížně automatizovatelné |
| Metoda magnetických kuliček | Jednoduché, vysoce čisté, lze automatizovat | - |
 |
Toto schéma ošetření je založeno na principu metody magnetických kuliček a je používáno v systému předúpravy biologických produktů rDNA, který umožňuje efektivní, jednoduchý a automatizovaný systém předúpravy.
Přístroj pro automatickou extrakci nukleových kyselin SCIENTZ je vybaven dobře známou značkou sady pro předúpravu zbytkových DNA hostitelských buněk (metoda magnetických kuliček) a rychlost obnovy různých vzorků je stabilní až na více než 80%, což může stabilně a účinně kontrolovat zbytkový obsah DNA hostitelské buňky v různých biologických produktech
Experimentální program
Experimentální materiály: přístroj pro automatickou extrakci nukleových kyselin (NP-2032), fluorescenční kvantitativní PCR přístroj (LightCycler480), souprava pro předběžnou úpravu zbytkových DNA hostitelských buněk (metoda magnetických kuliček), sada pro detekci počtu kopií genu CAR / TCR (metoda multiplexní PCR - metoda fluorescenční sondy) )
Experimentální vzorky: vzorky retroviru, vzorky buněk CAR-T, negativní kontrola
Experimentální kroky:
Pro monitorování.
Příprava experimentu - příprava vzorku - extrakce přípravného programu - spuštění detekce celkového zbytkového obsahu
Poznámky: Přístroj běží přibližně 30 minut
Experimentální výsledky:
| Ukázkový název | MeanCp | MeanConc | Vymáhaná částka | Skalární | Míra zotavení |
| Negativní kontrola | 36.43 | 0.00 | - | - | - |
| Negativní kontrola + (přenosná) | 18.67 | 86.62 | 8662.15 | 9707.85 | 89% |
| Negativní kontrola | 18.72 | 53.47 | 8020.723657 | 9868.821045 | 81% |
| Ukázka viru + | 19.15 | 63.10 | 8194.27 | 9707.85 | 84% |
| Vzorek buňky | 20.21 | 32.93 | 2811.241943 | 2740.516576 | 102% |
Experimentální výsledky:
Automatizované zpracování různých vzorků má stabilní a efektivní výsledky;
Účinnost automatizace dávkového zpracování je vyšší než účinnost ruční extrakce;
Splňuje požadavky nové míry zotavení USP; může to být dobrý pomocník pro předběžné zpracování detekce rDNA v biologických produktech.
Zobrazení produktu:
 |